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大孔層析介質(zhì)助力肺炎多糖和多糖蛋白結(jié)合疫苗的純化

2024. 08. 02
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隨著肺炎球菌結(jié)合多糖疫苗(PCV)的上市,接種疫苗的嬰幼兒和老年人中肺炎鏈球菌感染性疾病的發(fā)病率極大幅度地下降?;赑CV良好的安全性和保護效果,WHO積極推薦肺炎結(jié)合疫苗的使用,并且目前國內(nèi)已有多家企業(yè)積極推動和研發(fā)多價肺炎球菌結(jié)合疫苗的臨床申報和上市【1】。

而肺炎球菌結(jié)合疫苗企業(yè)對產(chǎn)品和血清型的覆蓋需要,目前已有的臨床研發(fā)企業(yè)越來越追求更高價的肺炎球菌結(jié)合疫苗,最新研究的為24價肺炎鏈球菌結(jié)合疫苗,其包括1、2、 3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、 14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F等多個血清型。

大孔層析介質(zhì)助力肺炎多糖和多糖蛋白結(jié)合疫苗的純化

國內(nèi)市場部分企業(yè)研發(fā)進度表

(數(shù)據(jù)來源網(wǎng)絡(luò))


對于生產(chǎn)肺炎球菌結(jié)合多糖疫苗廠家而言,需關(guān)注其在生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制問題,比如在生產(chǎn)肺炎球菌多糖疫苗時需做控制好各個型別間的C-多糖、DNA、HCP、內(nèi)毒素等的去除效果,并對作為代表研究和申報的多糖型別與其他多糖型別在數(shù)據(jù)上做出相應(yīng)的關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)依據(jù)。


大孔層析介質(zhì)助力肺炎多糖和多糖蛋白結(jié)合疫苗的純化

在對載體蛋白的選用上,目前大部分企業(yè)選擇CRM197、DT和TT中的一種或兩種,申請人需提供所選擇載體蛋白的選擇依據(jù)和相關(guān)研究資料,包括載體蛋白的發(fā)酵、純化等步驟的工藝規(guī)模、主要工藝參數(shù)及過程控制參數(shù)等,各步驟中非目標蛋白、蛋白聚體、工藝相關(guān)雜質(zhì)的去除效果研究等載體蛋白全套研究資料。

博進生物可針對載體蛋白相關(guān)的純化工藝,提供不同的層析交換介質(zhì)。

對于活化結(jié)合工藝的選擇各家企業(yè)均有不同,一般選用氰基活化、胺還原法,申請人需提供活化、結(jié)合工藝的選擇理由及相關(guān)研究數(shù)據(jù)。在多糖-蛋白結(jié)合工藝研究中需考察關(guān)鍵工藝參數(shù),如活化工藝參數(shù)和結(jié)合工藝參數(shù)等對結(jié)合物多糖大小、多糖-蛋白比、游離多糖含量等重要質(zhì)量屬性的影響。而在結(jié)合物的純化工藝中,應(yīng)對非結(jié)合的活化位點、游離蛋白、游離多糖去除效果做出嚴格把控【1】,如圖2


博進生物的疏水層析介質(zhì)產(chǎn)品對于肺炎球菌結(jié)合多糖疫苗關(guān)鍵純化工藝時,有較好的效果,如能有效去除游離蛋白和游離多糖。


不同方法純化肺炎多糖蛋白結(jié)合疫苗結(jié)合物中去除游離多糖的比較:

大孔層析介質(zhì)助力肺炎多糖和多糖蛋白結(jié)合疫苗的純化

其中對于多糖檢測硫酸蒽酮法,蛋白檢測Lowry法,游離多糖含量檢測脫氧膽酸鈉-鹽酸法【2】

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博進生物GPB丁基疏水層析介質(zhì)對多糖結(jié)合物純化層析圖譜

疏水層析在有效去除游離多糖的同時,多糖回收率及蛋白回收率相較其他方法都高,此處多糖結(jié)合疫苗回收率較好,疏水層析純化效果良好。

應(yīng)用層析介質(zhì)介紹:

1.GPQHL- 30高載量大孔強陰離子層析介質(zhì)

采用具有剛性結(jié)構(gòu)的超大孔聚甲基丙烯酸酯微球作為基質(zhì),通過特有的表面修飾技術(shù)改善聚合物基質(zhì)的親水性,以博進生物特有的高載量配基合成技術(shù)提升功能基團吸附性能。該填料具有高分辨率、高載量、低非特異性吸附以及優(yōu)良的生物相容性等優(yōu)點,尤其適用于病毒、疫苗等大生物分子的精細純化。

產(chǎn)品特性:

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2.GPB系列大孔疏水層析介質(zhì)

以高交聯(lián)度聚丙烯酸酯微球為基質(zhì),以Butyl為配基(疏水性依次增加),該介質(zhì)保留了聚合物微球的高機械強度,同時對生物活性大分子具有很好的相容性,特別適用于蛋白質(zhì)、酶、多糖、核酸、質(zhì)粒等的分離純化。

產(chǎn)品特性:

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參考來源:

1.肺炎球菌多糖結(jié)合疫苗的申報現(xiàn)狀及藥學(xué)研發(fā)思考。

2.HU Xiao-hua,TANG Shuang,WANG Hai-wei,.9V型肺炎球菌多糖蛋白結(jié)合物原液中游離多糖含量檢測方法的建立[J].中國生物制品學(xué)雜志, 2019(002):032


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